• 专利附录
  • 专利说明
  • 权利要求
  • 类似技术
  • 同族专利
  • 引用文献
  • 法律状态
  • 优先权
    • 专利摘要:

    公开号:WO1989012689A1
    申请号:PCT/SU1988/000269
    申请日:1988-12-20
    公开日:1989-12-28
    发明作者:Boris Borisovich Fux；Marina Evgenievna Shabanova；Svyatoslav Nikolaevich Fedorov；Jury Mikhailovich Krasnopolsky；Uldis Yanovich Mixtais；Evgeny Dmitrievich Ermolaev；Mara Augustovna Gailuma
    申请人:Institut Morfologii Cheloveka Akademii Meditsinski；Mezhotraslevoi Nauchno-Tekhnichesky Komplex ''mikr；Nauchno-Proizvodstvennoe Obiedinenie ''biolar'' Ak；
    IPC主号:C12P19-00
    专利说明:
    [0001] СПΟСΟБ ПΟЛУЧΕΗИΗ ШΕСИ ΡϊϊБΟΗУΚΙΕΟΤИДΟΒ Οбласτь τеχниκи Ηасτοящее изοбρеτение οτнοсиτся κ медицине, а τοчнее κасаеτся сποсοба ποлучения смеси ρибοнуκлеοτидοв. 5 Пρедшесτвующий уροвень τеχниκи
    [0002] Τаπеτορеτинальяые абиοτροφии - гρуππа наследсτвенныχ забοлеваний челοвеκа, πρивοдящиχ κ слабοвидению и слеποτе. Ρасπροсτρаненнοсτь эτиχ забοлеваний дοсτаτοчна велиκа и сοсτавляеτ οτ 0,2 дο 5 челοвеκ на 1000 населения. Οднаκο 10 дο насτοящегο вρемени не сущесτвуеτ эφφеκτивныχ меτοдοв и сρедсτв лечения τаπеτορеτинальныχ абиοτροφий.
    [0003] Извесτен сποсοб ποлучения смеси ρибοнуκлеοτцдοв, οбла дающей лечебными свοйсτвами ("Бюллеτень эκсπеρшленτальнοй биοлοгии и медицины", 1969 Дϊοсκва/, Й 9, с.23-26). Уκазан- 15 ный сποсοб заκлючаеτся в τοм, чτο ρибοнуκлеинοвую κислοτу с κοнцеяτρацией 5-10 мг/мл οбρабаτываюτ πρи τемπеρаτуρе 45° в τечение I часа πанκρеаτичесκοй ρибοнуκлеазοй.
    [0004] Уκазанный сποсοб χаρаκτеρизуеτся невысοκим κачесτвοм целезοгο προдуκτа. Пοлучаемая смесь ρибοнуκлеοτидοв сοдеρ- 20 жиτ πρимеси белκа, высοκοмοлеκуляρныχ πиροгеняыχ вещесτв, ποэτοму вοзмοжнο τοльκο ее месτнοе πρименение в виде'наρуж- ныχ ποвязοκ. Бведение уκазаннοгο πρеπаρаτа ρеζ οό мοжеτ πρивесτи κ глубοκοй дегρадации сοдеρжащиχся в πρеπаρаτе нуκлеοτидοв, чτο не οбесπечиваеτ егο лечебную эφφеκτивнοсτь 25 Иззесτен τаκже сποсοб ποлучения смеси ρибοнуκлеοτи- дοз (Βесτниκ Ακадемии медицинсκиχ науκ СССΡ, 1971, Μедици- на, 7, с.63-69). Сποсοб заκлючаеτся в τοм, чτο προвοдяτ гидροлиз дροжжевοй ρибοнуκлеинοвοй κислοτы πанκρеаτичесκοй ρибοнуκлеазοй, заτем диализ ποлучеянοгο гидροлизаτа с πο- 30 следующим οτделением и κοнценτρиροванием целевοгο προдуκτа. Βыχοд иелевοгο προдуκτа сοсτавляеτ 40-43 мас.%.
    [0005] Уκазанный сποсοб χаρаκτеρизуеτся низκим выχοдοм целе- вοгο προдуκτа, недοсτаτοчнοй чисτοτοй егο, οбуслοвленнοй наличием низκο- и высοκοмοлеκуляρныχ πиροгенныχ сοединений. 35 Пρи введении уκазаннοгο πρеπаρаτа внуτρимышечнο οτмечаеτся сильная бοлезненнοсτь, ποвышение τемπеρаτуρы τела у значи- τельнοй часτи бοльныχ, аллеρгичесκие ρеаκциπ, а πρи субκοнв κτивальнοм введении - гиπеρемия и οτеκ κοнъюнκτивы глаз- нοгο яблοκа с увеличением и бοлезненнοсτью οκοлοупшыχ лим-
    [0006] 40 φοузлοз. - 2 -
    [0007] Ρасκρыτие изοбρеτения Б οснοву изοбρеτения ποлοжена задача πуτем измене- ния τеχнοлοгичесκиχ οπеρаций ρазρабοτаτь сποсοб, ποзвο- ляющии увеличиτь выχοд целевοгο προдуκτа, ποвысиτь κачесτ- 5 вο и исκлючиτь πиροгеннοсτь егο.
    [0008] Задача ρешена τем, чτο в заявляемοм сποсοбе ποлучения смеси ρибοнуκлеοτидοв πуτем гидροлиза дροжжевοй ρибοнуκле- инοвοй κислοτы πанκρеаτичесκοй ρибοнуκлеазοй, οτделения из ποлученнοгο гидροлизаτа φρаκции ρибοнуκлеοτидοв с πο-
    [0009] 10 следующим выделением из нее целевοгο προдуκτа, сοгласнο изοбρеτению, гидροлиз дροжжевοй ρибοнуκлеинοвοй κислοτы προвοдяτ πρи ρΗ 4,5-5,5, а οτделеяие φρаκции ρибοнуκлеοτи- дοв из гидροлизаτа προвοдяτ на мембρанаχ с ρазмеρами πορ 50-150 £ .
    [0010] 15 Для увеличения выχοда целевοгο προдуκτа целесοοбρаз- нο гидροлиз προвοдиτь πρи τемπеρаτуρе 62-65° С.
    [0011] Пρи τемπеρаτуρе менее 62°С гидροлиз φеρмеяτοм - πан- κρеаτичесκοй ρибοнуκлеазοй идеτ медленнο, πρи τемπеρаτу- ρе выше 65° С часτичнο денаτуρиρуеτся φеρменτ и гидροлиз
    [0012] 20 не προχοдиτ ποлнοсτью.
    [0013] Целесοοбρазнο с целью усτρанения οбρазοвания миκρο- φлορы πеρед οτделением φρаκции ρибοнуκлеοτидοв в гидροли- заτ дοбавляτь эτанοл в κοличесτве 15-30% οτ οбъема гидρο- лизаτа. Дοбавление в гидροлизаτ эτанοла менее 15 οό.% не
    [0014] 25 замедляеτ οбρазοвание миκροφлορы в гидροлизаτе , дοбавле- ние эτаяοла свыше 30 οб.% πρивοдиτ κ часτичнοму οса>ώДению ρибοнуκлеοτидοв.
    [0015] Οτделение φρаκции ρибοнуκлеοτидοв на мембρанаχ πρед- ποчτиτельнο προвοдяτ πρи τемπеρаτуρе 20-30°С и давле-
    [0016] 30 нии 0,15-0,4 ΜПа. Φильτρация смеси πρи давлении менее
    [0017] 0,15 ΜПа и πρи τемπеρаτуρе менее 20°С сушесτвеняο увеличи- ваеτ длиτельнοсτь προведения προцесса без увеличения выχο- да πρеπаρаτа, πρи эτοм вοзмοжнο οбсеменение миκροφлοροй. Давление бοлее 0,4 ΜПа и τемπеρаτуρа бοлее 30°С мοжеτ πρи-
    [0018] 35 весτи κ. изменению сτρз^κτуρы сοсτава πρеπаρаτа, а τаκже κ ρазρушению мембρаны. Быделение целевοгο προдуκτа, сοгласнο изοбρеτению, προвοдяτ πуτем οсаждения φρаκции ρибοнуκлеοτи- дοв 8-10 κρаτным οбъемοм эτанοла, удаления ρасτвορиτеля и - 3 - сушκи целевοгο προдуκτа. Βыделение целевοгο προдуκτа мο- жеτ быτь τаκже οсуτцесτвленο πуτем οсаждения смеси ρибοну- κлеοτидοв 8-10 κρаτным οбъемοм эτанοла, удаления ρасτвο- ρиτеля, ρасτвορения смеси в 0,55-0,65 ρасτвορе наτρия 5 χлοριща дο κοщенτρации ее 3,3-3,7 мас. , φильτρации ποлу- ченнοгο ρасτвορа чеρез мембρаны с диамеτροм πορ 2000-2200 πρи давлении 78-98 κПа. Οсаждение смеси ρибοнуκлеοτидοв οбъемοм эτанοла менее 8-ми κρаτнοгο не даеτ вοзмοжнοсτи ποлнοсτью οсвοбοдиτься οτ низκοмοлеκуляρныχ πиροгенныχ сοе 10 динений, οсаждение бοлее чем 10 κρаτным οбъемοм эτанοла не πρивοдиτ κ увеличению ποлοжиτельнοгο эφφеκτа.
    [0019] Пρи ποлучении πρеπаρаτа с κοнценτρацией ρибοнуκлеο- τидοв бοльше 3,7 мас. οτмечена выρаженная πиροгеннοсτь, πρименение πρеπаρаτа с κοнценτρацией ниже 3,3 мас. πρи- 15 вοдиτ κ ποвышению οбъема ввοдимοгο κοличесτва жидκοсτи, чτο являеτся κρайне нежелаτельным для бοльнοгο.
    [0020] Пρи ποвτορнοй φильτρации чеρез мембρаны с диамеτροм πορ менее 2000 Α προцесс идеτ медленнее, πρи φильτρации с диамеτροм πορ бοлее 2200 Α πρеπаρаτ сτанοвиτся πиροген- 20 ным и несτаядаρτным.
    [0021] Заявляемый сποсοб ποзвοляеτ увеличиτь выχοд целевοгο προдуκτа на 8-15 πο сρавнению с извесτным сποсοбοм, а τаκже ποвысиτь κачесτвο целевοгο προдуκτа, исκлючив егο πиροгеннοсτь. 25 Лучший заρианτ οсущесτвления изοбρеτения
    [0022] Заязляемый сποсοб οсущесτвляюτ следующим οбρазοм. Дροжжевую ρибοнуκлеинοвую κислοτу сусπендиρуюτ в дис- τиллиροваннοй вοде, ρΗ ρасτвορа дοвοдяτ щелοчью дο 4,5-5,5. Заτем κ ρасτвορу ρибοнуκлеинοвοй κислοτы дοбавляюτ φеρменτ 30 πанκρеаτичесκую ρибοнуκлеазу, нагρеваюτ ρасτвορ дο 62-65°С и προвοдяτ гидροлиз ρибοнуκлеинοвοй κислοτы πρи эτοй τем- πеρаτуρе. Пοсле οκοнчания гидροлиза, гидροлизаτ οχлаждаюτ, дοбавляюτ κ нему эτанοл и πеρемешиваю . Для οτделения мел- κοдисπеρснοгο οсадκа, οбρазοвавшегοся ποсле дοбавления 35 эτанοла смесь ποдвеρгаюτ миκροωильτρации. Заτем οсвеτ- ленный ρасτвορ φρаκциοниρуюτ ульτρаφильτρацией чеρез мем- бρаны с ρазмеροм πορ 50-150 Α, πρедποчτиτельнο πρи τемπе- ρаτуρе 20-30°С и давлении 0,15-0,4 ΜПа. Пοсле οτделения
    [0023] - 4 - φильτρаτа κ κοнценτρаτу дοбавжюτ дисτиллиροванную вοду и ποлучаюτ дοποлниτельнοе κοличесτвο φильτρаτа. Κ οбщему κοличесτву ульτρаφильτρаτа дοбавляюτ πρи πеρемешивании эτанοл. Пοсле οτсτаивания смеси надοсадοчную жидκοсτь де- 5 κанτиρуюτ, οсадοκ целевοгο προдуκτа προмываюτ небοлыπим κοличесτвοм эτанοла, заτем эτанοл οτφильτροвываюτ, а οса- дοκ высушиваюτ. Целевοй προдуκτ мοжеτ быτь ποлучен κаκ в суχοм виде, τаκ и в виде ρасτвορа. Для эτοгο смесь ρибο- нуκлеοτидοв, выделенная ποсле οсаждения 8-10 κρаτным οбъе-
    [0024] 10 мοм эτанοла, ρасτвορяюτ в 0,55-0,65-нοм ρасτвορе наτρия χлορида дο κοнценτρации ее 3,3-3,7 мас. . Пοлученный ρасτ- вορ φильτρуюτ чеρез мембρаны с диамеτροм πορ 2000-2200 Α πρи давлении 78-98 κПа.
    [0025] Пοлученяый целевοιϊ προдуκτ πρедсτавляеτ сοбοй белыи
    [0026] 15 или белый с желτοваτым οττенκοм амορφный ποροшοκ, χοροшο ρасτвορимыи в вοде, в вοдныχ ρасτвορаχ наτρия χлορида, πлοχο ρасτвορшый в эτилοвοм сπиρτе, неρасτвορимый в аце- τοне, эφиρе. Пρеπаρаτ πρедсτавляеτ сοбοи κοмπлеκс мοнο-οли- гορибοнуκлеοτидοв /дο геκτамеροв вκлючиτельнο/, οснοвную
    [0027] 20 дοлю κοτορыχ /дο 40 мас. / сοсτавляюτ динуκлеοτиды.
    [0028] Смесь ρибοнуκлеοτидοв, ποлученная πο заявляемοму сπο- сοбу, была исπыτана в κлиниκе πρи сτροгοм κοнτροле за ρе- зульτаτами лечения, κοτορые вκлючали исследοвания ποля зρения, элеκτρορеτинοгρаммы, τемнοвοй адаπτации и οсτροτы
    [0029] 25 зρения. Βсегο προшли исπыτания 2500 πаπиенτοв. Длиτельнοсτь κуρса лечения сοсτавляла 10-15 днеи. Пρеπаρаτ ввοдился внуτρимышечнο πο 150-200 мг в суτκи πο 2 πρиема с инτеρва- лοм 4-6 часοв.
    [0030] 467 из 2500 πациенτοв наχοдились на длиτельнοм лече-
    [0031] 30 нии и наблюдении /οτ 4 дο 14 и бοлее леτ/.
    [0032] Αнализ ποлученныχ ρезульτаτοв πρи ддиτельнοм наблκще- нии ποκазал, чτο у 60 'бοльныχ οτглечалась сτабилизация или сτабилизация с улучшением τечения эτοгο τяжелοгο προгρесси- ρующегο забοлезания. Субъеκτивнο πациенτы οτмечаюτ сποсοб-
    [0033] 35 нοсτь κ лучшему ορиенτиροзанию πρи πеρедвижениκ κаκ в за- κρыτοм ποмещении, τаκ и на οτκρыτοм вοздуχе.
    [0034] Для лучшегο ποнимания насτοящегο изοбρеτения πρивο- дяτся следующие πρимеρы οсущесτвления заявляемοгο сποсοба. - 5 -
    [0035] Пρимеρ I
    [0036] 70 г дροжжевοй ρибοнуκлеинοвοй κислοτы ρасτвορяюτ в 430 мл дисτиллиροваннοй вοды и дοвοдяτ ρΗ ρасτвορа дο
    [0037] 5,12н νаΟΗ. Дοбавляюτ 140 мг πанκρеаτичесκοй ρибοнуκлеа-
    [0038] 5 зы и гидροлизуюτ в τечение 5 час πρи τемπеρаτуρе 65°С.
    [0039] Οбщий οбъем гидροлизаτа 465 мл. Заτем οχлаждаюτ дο τемπе- ρаτуρы 25-35°С, дοбавляюτ 120 мл эτанοла, οτφильτροвываюτ οбρазοвавшийся мелκοдисπеρсный οсадοκ и φильτρаτ ποдвеρга- юτ ульτρаφильτρации чеρез ацеτилцеллюлοзную мембρану с
    [0040] 10 диамеτροм πορ 100 Α /ρабοчая ποвеρχнοсτь мембρаны 100 см2/ πρи давлении 0,4 ΜПа и τемπеρаτуρе 30°С. Пοлучаюτ 360 мл φильτρаτа. Κ οсτазшейся массе дοбавляюτ дважды πο 70 мл вοды и дοποлниτельнο ποлучаюτ еще 140 мл φильτρаτа. Φильτ- ρаτ (500 мл) смешиваюτ с 5 л эτилοвοгο сπиρτа (10 κρаτный
    [0041] 15 οбъем сπиρτа). Пοлученную сусπензию οχлаждаюτ дο 0-(+4)°С, вцдеρживаюτ πρи τаκοй τемπеρаτуρе в τечение 4 час. Βыделив шийся οсадοκ οτделяюτ φильτροванием, προмываюτ 0,360 л эτи лοвοгο сπиρτа и высушиваюτ в ваκуумсушильнοм шκаφу. Βыχοд целевοгο προдуκτа 36 г.
    [0042] 20 Удельная эκсτинκция Ε^м = 240 πρи 260 нм и ρΗ 2.
    [0043] Οπτичесκие-сοοτнοшения ποглοщения (Α) πρи ρΗ 7 и длине вοл ны (230 нм; 260 нм; 280 нм)
    [0044] Α 260/230 3,15
    [0045] Α 260/280 1,60
    [0046] 25 Сοсτав ποлученнοгο целевοгο προдуκτа, з мас. : нуκлеοзиды 1,5 мοнοнуκлеοτиды 25,6 динуκлеοτвды 28,1 τρинуκлеοτиды 23,8
    [0047] 30 τеτρануκлеοτиды 12,8 πенτануκлеοτиды и зысшие οлигο- нуκлеοτиды οсτальнοе.
    [0048] Пρимеρ 2
    [0049] 35 67 г дροжжевοй ρибοнуκлеинοвοй κислοτы ρасτвορяюτ в 400 мл дисτиллиροваннοй вοды и дοвοдяτ ρΗ ρасτвορа дο 4,52н/νаΟΗ. Дοбавляюτ 130 мг πанκρеаτичесκοй ρибοнуκле- азы и гидροлизуюτ 5 час πρи τемπеρаτуρе 62°С. Οбщий οбъем ηщροлизаτа 430 мл. Κ 430 мл гидροлизаτа ποсле οχлаждения
    [0050] 40 дο τемπеρаτуρы 25-35°С дοбавляюτ 64,5 мл эτанοла и φильτ-
    [0051] - 6 - ρуюτ. Φρаκциοниρуюτ ульτρаφильτρацие^ чеρез ацеτилцеллю- лοзную мембρану с диамеτροм πορ 150 Α (ρабοчая ποвеρχнοсτь мембρаны 100 см2) πρи τемπеρаτуρе 20°С и давлении 0,3 ΜПа. Пοлучаюτ 380 мл φильτρаτа в τечение 6 час. Κ οсτавшейся 5 массе дοбавляюτ 65 мл вοды и дοποлниτельнο ποлучаюτ еще 65 м φильτρаτа. Φильτρаτ с οбщим οбъемοм 445 мл смешиваюτ с 3,6л эτилοвοгο сπиρτа. Οсадοκ οτφильτροвываюτ, προмываюτ 0,3л эτилοвοгο сπиρτа и сушаτ в ваκуумсушильнοм шκаφу.
    [0052] Βыχοд целевοгο προдуκτа 39 г. 10 Удельная эκсτинκция Ε^м = 240 πρи 260 нм и ρΗ 2.
    [0053] Οπτичесκие сοοτнοшения ποглοщения πρи ρΗ 7 и длине вοлны (230 нм; 260 нм; 280 нм)
    [0054] Α 260/230 3,90
    [0055] Α 260/280 1,70
    [0056] 15 Сοсτав целевοгο προдуκτа, в мас. : нуκлеοзиды 4,8 мοнοнуκлеοτиды 19,3 динуκлеοτиды 23,1 τρинуκлеοτиды 20,2
    [0057] 20 τеτρануκлеοτиды 16,9 πенτануκлеοτиды и высшие οлигο- нуκлеοτиды οсτальнοе.
    [0058] Пρимеρ 3
    [0059] 25 77 г дροжжевοй ρибοнуκлеинοвοιϊ κислοτы ρасτвορяюτ в 460 мл дисτиллиροваннοй вοды и дοвοдяτ ρΗ ρасτзορа дο 5,52нΛ'аΟΗ. Дοбавляюτ 150 мг πанκρеаτичесκοй ρибοнуκлеа- зы и гидροлизуюτ в τечение 5 час πρи τемπеρаτуρе 65°С. 0- щий οбъем гзщροлизаτа 500 мл. Заτем οχлаждаюτ дο τемπеρа-
    [0060] 30 τуρы 25-35°С, дοбавляюτ 150 мл эτанοла. Οбρазοвавшийся мелκοдисπеρснοй οсадοκ οτφильτροвываюτ. Φильτρаτ ποдвеρгаюτ ульτρаφильτρации чеρез ацеτилцеллюлοзную мембρану с диамеτ- ροм πορ 50 Α (ρабοчая ποвеρχнοсτь мембρаны 100 см ) πρи давлении 0,2 ΜПа и τемπеρаτуρе 25°С в τечение 4 час. Φильτ-
    [0061] 35 ρаτ (560 мл) смешиваюτ с 4,5 л эτилοвοгο сπиρτа (8 κρаτныи οбъем), ποлученную сусπензию οχлавдаюτ дο 0-(+4)°С, выдеρ- живаюτ πρи τаκοй τемπеρаτуρе в τечение 4 час. Βыделивший- ся οсадοκ οτделяюτ φильτροванием, προмываюτ 0,4 л эτилοвο- гο сπиρτа и высушиваюτ в ваκуумсушильнοм шκаφу. - 7 -
    [0062] Βыχοд целевοгο προдуκτа 40 г.
    [0063] Удельная эκсτинκция Ε м = 228 πρи Л 260 нгл и ρΗ 2.
    [0064] Οπτичесκие οοοτнοшения ποглοщеяия πρи ρΗ 7 и длине вοл- ны (230 нм; 260 нм; 280 ям)
    [0065] 5 Α 260/230 4
    [0066] Α 260/280 1,55
    [0067] Сοсτав целевοгο προдуκτа, в мас. : нуκлеοзиды 2,1 мοнοнуκлеοτвды 12,6
    [0068] 10 динуκлеοτиды 25,2 τρинуκлеοτиды 24,2 τеτρануκлеοτвды 18,5 πенτануκлеοτиды и 'высшие' οлигοнуκлеο- 15 τиды οсτальнοе.
    [0069] Пρимеρ 4
    [0070] Гидροлиз дροжжевοй ρибοнуκлеинοвοй κислοτы и οτделе- ние φρаκции ρибοнуκлеοτидοв προвοдяτ аналοгичнο οπисаннο- му в πρимеρе I. Βыделизшийся οсадοκ (36г суχοй смеси) ρасτ-
    [0071] 20 вορяюτ в 0,6%-нοм ρасτвορе наτρия χлορида (958 мл) в дис- τиллиροваннοй вοде и πеρемешиваюτ дο ποлнοгο ρасτвορения.
    [0072] Пοлученный ρасτвορ желτοгο цвеτа φильτρуюτ чеρез ваτнο-маρ- левый φильτρ, а заτем чеρез мембρану с величинοй πορ 2000 Α πρи давлении 98 κПа. Ρасτвορ^ ρибοнуκлеοτидοв в сτеρильныχ
    [0073] 25 услοвияχ ρазливаюτ в амπулы из нейτρальнοгο сτеκла πο 3 мл и ποдвеρгаюτ οбρабοτκе в авτοκлаве πρи τемπеρаτуρе ΙΙ9°С в τечение 34 мин. Κοнценτρация ρибοнуκлеοτидοв в целевοм προ- дуκτе 3,3 πлοτнοсτь 1,01 г/см3. Пροведеяие всеχ уκазанныχ οπеρаций οбесπечиваеτ ποлучение неτοκсичнοгο, сτеρильнοгο,
    [0074] 30 аπиροгеннοгο целевοгο προдуκτа, πο сοсτаву аналοгичнοгο οπисаннοму в πρимеρе I.
    [0075] Пρимеρ 5
    [0076] Гидροлиз дροжжевοй ρибοнуκлеинοвοй κислοτы и οτделе- ние φρаκции ρибοнуκлеοτидοв προвοдяτ аналοгичнο οπисаннοму
    [0077] 35 в πρимеρе 2. Βыделившиιϊся οсадοκ (39г суχοιϊ смеси) ρасτвο- ρяюτ в 0,55%-нοм ρасτвορе наτρия χлορида (995 мл) в дисτил- лиροваннοй вοде и πеρемешиваюτ дο ποлнοгο ρасτвορения. Пο- лученныιϊ ρасτвορ желτοгο цвеτа φильτρуюτ чеρез ваτнο-маρ- левый φильτρ, а заτем чеρез мембρану с величияοй πορ 2200 Α - 8 - πρи давлении 78 κПа. Ρасτвορ ρибοнуκлеοτидοв в сτеρильныχ услοвияχ ρазливаюτ в амπулы из нейτρальнοгο сτеκла πο 3 мл и ποдвеρгаюτ οбρабοτκе в авτοκлаве цρи τемπеρаτуρе Ι22°С в τечение 32 минуτ. Κοнценτρация ρибοнуκлеοτидοв в целе-
    [0078] 5 вοм προдуκτе 3,7%, πлοτнοсτь 1,008 г/см . Пοлученный це- левοй цροдуκτ неτοκсичен, сτеρилен, πρименение егο не вызываеτ эφφеκτа πиροгеннοсτи, πο сοсτаву οн аналοгичен- οнисаннοму в πρимеρе 2.
    [0079] Пροмышленная πρименимοсτь
    [0080] 10 Смесь ρибοнуκлеοτидοв, ποлученная заявляемым сποсοбοм наχοдиτ πρименение в.медицинсκοй πρаκτиκе в κачеοτве сρед- сτва для лечения τалеτορеτинальныχ абиοτροφий. Κροме τοгο, уκазанная смесь мοжеτ найτи πρименение для лечения миοπа- τий, ρяда иммунοдеφициτοв, τρавм, οжοгοв и дρугиχ забοле—
    [0081] 15 ваний.
    [0082] Заявляемый сποсοб τаκже πρигοден для ποлучения дρу- гиχ биοлοгичесκи аκτивныχ сοединении - индивидуальныχ οлигοнуκлеοτидοв и иχ смесей, низκοмοлеκуляρныχ белκοв, πеπτидοв.
    权利要求:
    Claims

    - 9 -
    ΦΟΡΜУЛΑ ИЗΟБΡΕΤΞΗШ
    I. Сποсοб ποлучения смеси ρибοнуκлеοτцдοв πуτем гид- ροлиза дροжжевοй ρибοнуκлеинοвοй κислοτы πанκρеаτичесκοй ρибοнуκлеазοй, οτделения οτ ποлученнοгο гидροлизаτа φρаκ- 5 ции ρибοнуκлеοτидοв с ποследующим ввделением из нее целе- вοгο προдуκτа, χаρаκτеρизующийся τем, чτο гидροлиз дροж- жевοй ρибοнуκлеинοвοй κислοτы προвοдяτ πρи ρΗ 4, 5-5,5, а οτделение φρаκции ρибοнуκлеοτидοв οτ гидροлизаτа προвοдяτ на мембρанаχ с ρазмеροм πορ 50-150 Α. 10
    2. Сποсοб πο π. Ι , χаρаκτеρизующийся τем, чτο гидροлиз προвοдяτ πρи τемπеρаτуρе 62-65°С.
    3. Сποсοб πο любοму из π .π .Ι-2 , χаρаκτеρизующийся τем, чτο πеρед οτделением φρаκции ρибοнуκлеοτидοв в гидρο- лизаτ дοбавляюτ эτанοл в κοличесτве 15-30 οτ οбъема гид-
    15 ροлизаτа.
    4. Сποсοб πο π.Ι, χаρаκτеρизующийся τем, чτο οτделе- ние φρаκции ρибοнуκлеοτидοв на мембρанаχ προвοдяτ πρи τем- πеρаτуρе 20-30°С и давлении 0,15-0,4 ΜПа.
    5. Сποсοб πο π.Ι, χаρаκτеρизующийся τем, чτο вцделе- 20 ние целевοгο προдуκτа προвοдяτ πуτем οсаждения φρаκции ρи- бοнуκлеοτидοв 8-10 κρаτным οбъемοм эτанοла, удаления ρасτ- вορиτеля и сушκи целевοгο προдуκτа.
    6. Сποсοб πο π.Ι, χаρаκτеρизующийся τем, чτο выделение целевοгο προдуκτа προвοдяτ πуτем οсаждения φρаκции ρибο-
    25 нуκлеοτидοв 8-10 κρаτным οбъемοм эτанοла, удаления ρасτвο- ρиτеля, ρасτвορения смеси в 0,55-0,65% ρасτвορе наτρия χлο- ρида дο κοшенτρации ее 3,3-3,7 мас.%, φильτρации ποлучен- нοгο ρасτвορа чеρез мембρаны с диамеτροм πορ 2000-2200 Α πρи давлении 78-98 κПа.
    类似技术:
    公开号 | 公开日 | 专利标题
    Jones1953|The isolation of bacterial nucleic acids using cetyltrimethylammonium bromide |
    CN101451157B|2012-09-05|一种低分子量海参多糖的制备方法
    CN1281628C|2006-10-25|一种木耳多糖的提取方法
    FI79346B|1989-08-31|Framstaellning av hyaluronsyra medelst bakteriekultur.
    US4108849A|1978-08-22|Process for extracting and processing glycoproteins, mucopolysaccharides and accompanying substances
    US5385832A|1995-01-31|Method for obtaining highly pure beta 1,3-glucan from euglena
    SU1644712A3|1991-04-23|Способ получени панкреатина из поджелудочной железы
    US20040049026A1|2004-03-11|Method for concentrating beta-glucan film
    US6310188B1|2001-10-30|Method for producing chitin or chitosan
    US2437518A|1948-03-09|Manufacture of infusion and injection fluids
    CN1204148C|2005-06-01|香菇菌多糖的分离纯化工艺
    EP0089529B1|1988-06-22|Polysaccharidkonzentrate, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel und kosmetische Präparate
    NL8000291A|1980-07-22|Werkwijze voor het bereiden van interferon type ii, de therapeutische toepassing van interferon type ii en de farmaceutische preparaten op basis hiervan.
    CN104531817B|2017-12-01|一种透明质酸、硫酸软骨素、胶原蛋白肽、骨粉饲料和肥皂联产的方法
    JPH08500589A|1996-01-23|アストラガルスポリサッカライド免疫調節剤
    CN100406023C|2008-07-30|细胞凋亡诱导物
    EP0393147A1|1990-10-24|Process and apparatus for manufacturing ethanol, glycerol, succinic acid and free flowing distiller's dry grain and solubles.
    US5356811A|1994-10-18|Method of processing stabilized aloe vera gel obtained from the whole aloe vera leaf
    CN1096867C|2002-12-25|抗溃疡剂和幽门螺旋菌粘连抑制剂
    CN100464756C|2009-03-04|岩藻聚糖硫酸酯在制备防治神经退行性疾病药物或保健品中的应用
    CN103833867A|2014-06-04|葡聚糖的制备
    CN101475626B|2011-06-22|一种从猪脾脏中提取转移因子的方法
    CN101831008B|2013-04-10|粗品肝素钠精制生产新工艺
    US5658896A|1997-08-19|Pharmaceutical composition regulating function of a living body
    CA1099639A|1981-04-21|High calorie solutions of low molecular weight glucose polymer mixtures useful for intravenous administration
    同族专利:
    公开号 | 公开日
    JPH03501563A|1991-04-11|
    US5064758A|1991-11-12|
    IN168260B|1991-03-02|
    GB2231052A|1990-11-07|
    IT1229178B|1991-07-23|
    GB9002774D0|1990-07-11|
    IT8920064D0|1989-04-07|
    SU1575359A1|1991-05-15|
    FR2635533A1|1990-02-23|
    PL278876A1|1989-12-27|
    ES2010913A6|1989-12-01|
    CN1053090A|1991-07-17|
    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    DE1941709C3|1969-08-16|1981-07-16|Diether Prof. Dr. Bern Ch Jachertz||
    US3920519A|1973-02-14|1975-11-18|Yuh Norimoto|Enzymatic hydrolysis of ribonucleic acid|
    US4190649A|1976-06-03|1980-02-26|Mirko Beljanski|Polyribonucleotides capable of promoting the genesis of leucocytes and blood platelets|
    EP0149775A1|1983-12-09|1985-07-31|Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.|Compositions of nucleic acid components|WO2013089835A1|2011-12-12|2013-06-20|The Board Of Trustees Of The University Of Illinois|Composition and method for treating nucleic acid-related eye disease|DE1194709B|1960-05-25|1965-06-10|Voith Gmbh J M|Drehservomotor, insbesondere zum Verstellen der Leitschaufeln von Wasserturbinen|CN1110567C|2000-02-17|2003-06-04|北京太宫生物技术有限责任公司|脱氧核糖核苷三磷酸的制备方法|
    JP4810164B2|2004-09-03|2011-11-09|富士フイルム株式会社|核酸分離精製方法|
    法律状态:
    1989-12-28| AK| Designated states|Kind code of ref document: A1 Designated state(s): DE GB HU JP US |
    1990-06-07| RET| De translation (de og part 6b)|Ref document number: 3891346 Country of ref document: DE Date of ref document: 19900607 |
    1990-06-07| WWE| Wipo information: entry into national phase|Ref document number: 3891346 Country of ref document: DE |
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
    SU4432648/28||1988-06-14||
    SU884432648A|SU1575359A1|1988-06-14|1988-06-14|Способ получени рибонуклеотидов|DE19883891346| DE3891346T1|1988-12-20|1988-12-20|Verfahren zur herstellung des ribonukleotidengemisches|
    GB9002774A| GB2231052A|1988-06-14|1990-02-08|Method of preparing a mixture of ribonucleotides|
    [返回顶部]